【GAPDH的作用】广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参，即将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后才进行样品与样品之间的比较。

　　【GAPDH】或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ）的英文缩写。GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，且GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的。

　　【Western Blot】蛋白质印迹法（免疫印迹试验）。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

　　◆Real－time PCR技术的原理就是用一种标准对照能够估计出一种特异性靶DNA或RNA分子的相对含量。

　　◆这种标准对照就是参照物，在定量PCR中，用它来作为扩增系统的阳性对照，并作为未知样品定量的标准，同时通过竞争性作用校正扩增系统内管间的扩增效率，使其具有可比性。参照物按其性质不同可分为内参照和外参照。内参照是与目的基因加于同一反应管中，与目的基因同时进行扩增，以反映体系中可能出现的PCR影响因素，此即所谓的竞争性PCR；而外参照则是参照物与目的基因的扩增分别在不同的管间进行，此即所谓的非竞争性PCR。

　　◆搞清了内参和外参的概念，你的问题也就很容易解答了：由于你实验中GAPDH和目的基因反应体系是在不同的EP管中进行，所以它应属于外参照。

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　　3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)一直以来被认为是一种只分布在细胞质中、仅在糖酵解过程中起关键作用的酶。但是近年来,越来越多的研究表明GAPDH是一种多功能蛋白,且在细胞核、细胞质、生物膜上均有定位。如在细胞核内,GAPDH参与tRNA出核、mRNA稳定性调节、DNA损伤修复、组蛋白转录调控、凋亡及神经退行性疾病发生等。在细胞质中,GAPDH有磷酸激酶活性、催化微管聚合的功能及参与细胞保护。在生物膜上,GAP-DH可促进膜融合、参与膜转运等

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